摘要
采用醇沉法从桉木预水解液中提取半纤维素粗多糖（PHLP），并利用DEAE-650M离子交换柱对其进行分离纯化，对纯化得到的中性多糖PHLP-1和酸性多糖PHLP-2两种组分进行分析。单糖组分结果表明，PHLP-1和PHLP-2均由阿拉伯糖、木糖、半乳糖、甘露糖及葡萄糖组成，摩尔比分别为0.09∶1∶0.13∶0.07∶0.35和0.1∶1∶0.03∶0.09∶0.08。红外光谱测定表明，两种组分均具有多糖的特征吸收峰。扫描电子显微镜表明，PHLP-1和PHLP-2呈无序杂乱的结构形态。抗氧化实验结果表明，两种纯化的多糖组分均具有一定的抗氧化性且存在量效关系，抗氧化能力强弱顺序为：PHLP-2＞PHLP-1＞PHLP。
随着黏胶纤维以及纤维制品需求量的不断增加，未来几年内用于生产再生纤维的溶解浆产量也日益增
在预水解液半纤维素进行高附加值利用时，预水解液中的杂质会阻碍其有效利用，因此需要对半纤维素进行分离和纯
本研究通过对半纤维素粗多糖分离纯化得到纯化多糖，对其单糖成分、结构表征及体外抗氧化活性进行研究，以期对预水解液的进一步研究奠定理论基础。
桉木预水解液（PHL），山东太阳纸业股份有限公司；浓硫酸、氯化钠、无水乙醇，分析纯，天津市江天化工技术有限公司；无水甲醇，色谱纯，天津市康科德科技有限公司；DEAE-650M，生化试剂，TOSOH公司；葡萄糖、木糖、阿拉伯糖等，色谱纯，Sigma公司。
7000B气质联用仪，美国安捷伦公司；T6新世纪紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任；N-1100旋转蒸发仪，上海爱朗仪器有限公司；FTIR-650傅里叶变换红外光谱仪，天津港东科技发展股份有限公司；H3021D高速离心机，上海知信实验仪器技术有限公司；SCIENTZ-10N冷冻干燥机，宁波新芝生物科技股份有限公司；1530VP扫描电子显微镜，德国LEO公司。
将离心除杂后的桉木预水解液原样进行旋转蒸发浓缩，使用浓硫酸酸化预水解液至pH值2.0，除去木素，静置过夜。取上清液以体积比1∶4的比例加入无水乙醇沉淀（使无水乙醇含量达到80%），静置24 h，8000 r/min离心15 min，收集沉淀物，真空冷冻干燥获得半纤维素粗多糖（PHLP）。
将PHLP配制成浓度为1 mg/mL的溶液，取20 mL溶液加样至DEAE-650M阴离子交换层析柱，依次用蒸馏水、0.2、0.4、0.6 mol/L的NaCl溶液进行梯度洗脱，每个梯度洗脱100管。使用收集器收集，每管收集5 mL。采用苯酚-硫酸
釆用硫酸-咔唑法测
图1 葡萄糖醛酸溶液标准曲线
Fig. 1 Standard curve of glucuronic acid solution
分别配置1 mg/mL的各单糖标准溶液，包括葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖及半乳糖放入试管中。分别取0、40、80、100、250、500 µL单糖冻干。在冻干后的标准单糖样品中，分别加入50 μL浓度为20 mg/mL的甲氧基铵盐酸盐/吡啶溶液，40℃水浴80 min后加入80 μL的N,O-双（三甲基硅基）三氟乙酰胺（BSTFA），混匀，40℃水浴80 min，然后在10000 r/min下离心10 min，取上清液过0.22 μm滤膜后置于进样瓶，进行气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）分析。
称取2 mg多糖于反应釜中，加入5 mL三氟乙酸（2 mol/L 三氟乙酸（TFA）），密封后120℃水解2 h，之后加入无水甲醇旋蒸除去残留TFA，最后加入2 mL去离子水，混匀，取100 μL混合液于新的离心管中，真空冷冻干燥。按照1.3.5.1标准单糖的衍生化方法处理，反应产物进行气质分析。
称取纯化后的多糖至玛瑙研钵中，按照1∶100的比例加入干燥后的溴化钾做分散剂，研磨成微细粉末，然后置于模具中，以10 MPa 压力压制1 min制片，进行红外光谱测定。光谱扫描范围400~4000 c
在金属样品台上粘贴一块导电胶用于固定样品，取适量纯化后的多糖样品置于导电胶上，用洗耳球轻轻吹去浮样，将金属样品台放入离子溅射装置中镀一层导电金膜，镀膜后用1530VP扫描电子显微镜进行观察。
参考冯炘等
| （1） |
式中，A1为实验组吸光度；A2为样品本底吸光度；A0为空白组吸光度。
参考XU等
| （2） |
式中，B1为实验组吸光度；B2为样品本底吸光度；B0为空白组吸光度。
参考DONG等
| （3） |
式中，C1为实验组吸光度；C2为样品本底吸光度；C0为空白组吸光度。
参考CHEN等
| （4） |
式中，D1为实验组吸光度；D2为样品本底吸光度；D0为空白组吸光度。
在阴离子交换层析柱中，氯化钠溶液中的阴离子（氯离子）将会与吸附在填料上的多糖竞争，而使用蒸馏水和不同浓度的氯化钠溶液洗脱则可以达到分离多糖的目的。
以DEAE-650M离子交换层析柱对PHLP进行分离纯化，得到洗脱曲线如
图2 多糖的DEAE-650M洗脱曲线
Fig. 2 Elution curve of crude polysaccharides on DEAE-650M
因糖类物质的极性较大，难以汽化，因此在使用气质联用分析多糖时，需要对糖进行衍生化处理，使其成为易于汽化的衍生物。本研究采用硅烷化法对5种单糖标准品进行衍生化，然后进行GC-MS分析，结果如
图3 单糖标准品的GC-MS色谱图
Fig. 3 GC-MS chromatogram of monosaccharide standard
图4 多糖PHLP-1、PHLP-2的GC-MS色谱图
Fig. 4 GC-MS chromatogram of polysaccharides of PHLP-1, PHLP-2
图5 PHLP-1、PHLP-2的FT-IR图
Fig. 5 FT-IR spectra of PHLP-1 and PHLP-2
图6 多糖PHLP-1、PHLP-2的SEM图
Fig. 6 SEM images of polysaeeharides from PHLP-1 and PHLP-2
DPPH自由基是一种常见的稳定自由基，常被用于评估抗氧化剂自由基清除能
图7 PHLP-1、PHLP-2及粗多糖对DPPH自由基的清除能力
Fig. 7 DPPH radical scavenging activities of PHLP-1, PHLP-2 and crude polysaccharides
多糖作为供氢体可以和ABTS自由基反应，通过反应后溶液吸光度值降低的大小，从而来判断多糖的抗氧化能
图8 PHLP-1、PHLP-2及粗多糖对ABTS自由基的清除能力
Fig. 8 ABTS radical scavenging activities of PHLP-1, PHLP-2 and crude polysaccharides
O
图9 PHLP-1、PHLP-2及粗多糖对O
Fig. 9 O
O
图10 PHLP-1、PHLP-2及粗多糖对O
Fig. 10 O
本研究采用醇沉法从桉木预水解液中提取半纤维素粗多糖（PHLP），并利用DEAE-650M离子交换柱对其进行分离纯化，对纯化得到的中性多糖PHLP-1和酸性多糖PHLP-2两种组分进行分析。
3.1 单糖组分结果表明，PHLP-1和PHLP-2两种多糖均由阿拉伯糖、木糖、半乳糖、甘露糖及葡萄糖组成，其摩尔比分别为0.09∶1∶0.13∶0.07∶0.35和0.1∶1∶0.03∶0.09∶0.08。
3.2 红外光谱测定表明，PHLP-1和PHLP-2均具有多糖典型的特征吸收峰，都含有吡喃环和β-糖苷键，并且PHLP-1含有α-糖苷键，而PHLP-2为不含α-糖苷键的酸性多糖。扫描电子显微镜观察PHLP-1和PHLP-2均呈无序杂乱的结构形态。
3.3 抗氧化结果表明，PHLP-1和PHLP-2及粗多糖对DPPH自由基和ABTS自由基均具有较强的清除能力，对O
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